Wéi Dir dësen immunohistochemesche Fanger Buffer mécht
Phosphat Buatur Salzin (PBS) ass eng Puffer-Léisung déi allgemeng fir immunhistochemisch (IHC) gefierft gëtt an et ass oft an der biologescher Fuerschung benotzt. PBS ass eng Salzbasis Salzléisung, déi Natriumwasserstoffphosphat, Natriumchlorid oder a ville Fäll vu Kaliumchlorid a Kaliumdihydrogenphosphat enthält.
Immunhistochemësch Färber
Immunhistochemie bezitt sech op de Prozess vun der Detektioun vun Antigen wéi Proteinen an de Zellen vun enger Gewëssegiel duerch de Prinzip vun Antikörpern, déi spezifesch fir Antigene an biologeschen Gewëss verbonne sinn.
Immunofluoreszent Färzen ass déi éischt immunohistochemesch Fanger Method.
Antigene si sichtbar ze gesinn, wann mat Antikörpern mat Fluoreszenzfarbstécke gekuckt ginn wéinst enger Antigen-Antikörperbindemittel Dës Prozess geschitt wann et duerch spannend Licht vun enger spezifescher Wellelengung ënner engem fluoreszenden Mikroskop aktivéiert gëtt.
D'Osmolaritéit an d'Ionenkonzentraktioune vun de Léisunge passen déi vum mënschleche Kierper - si assotonesch.
A Rezept fir PBS
Dir kënnt PBS op verschidde Manéiere preparéieren. Et gi verschidde Formelen. Verschidde vun hinnen hunn Kalium net enthalen, aner sinn Kalium oder Magnesium .
Dësen Rezept ass relativ einfach. Et ass fir 10X PBS Stock Léisung (0,1 M). Allerdéngs kënnt Dir och eng 1X Stock Léisung maachen oder mat dësem 10X Rezept ufänken a verdoppelen se op 1X.
De ganze Prozess dauert ongeféier 10 Minutten.
Eng Optioun fir Tween ze addéieren ass och matgedeelt.
Wat Dir musst PBS Buffer maachen
- Natriumphosphat monobasesch (trëftlech)
- Natriumphosphat dibasesch (ouni Waasser)
- Sodiumchlorid
- Skala a waacht Schëffer
- Magnéit fir Rührer a Rousen Bar
- Eng pH-Sonde déi kalibréiert an adequat Léisunge fir de pH anzestellen
- 1L Volumenkraaft
- Tween 20 (fakultativ)
Wéi kënne Phosphat Buuffered Saline (PBS)
Weigh 10,91g Dehydréit Natriumphosphat dibasesch (Na2 HPO4), 3,2 g Äbass Natriumphosphat monobasesch (NaH2PO4) an 90g Natriumchlorid (NaCl).
Loosst just ënner 1L destilléiert Waasser.
Ajustéiert den PH op 7,4 a mécht d'Léisung bis zu engem definitiven Volume vun 1L.
Verdreift 10X virum Gebrauch a reaktivéiert de pH wann néideg.
Dir kënnt eng PBS Léisung mat 0,5 Prozent Tween 20 maachen andeems 5mL Tween 20 zu der 1L Léisung eropgitt.
Tipps fir PBS Buffer ze maachen
De Puffer bei Raumtemperatur spueren, nodeems Dir d'PBS -Léisung gemaach hutt.
Net wéiderréis Reagent kann ersat ginn, awer Dir musst déi entspriechend Mass vun all eenzelne berechnen fir d'addéiere Waassermileküle z'erkennen.
Verwäertung vu Phosphat Buuffered Salin (PBS)
Phosphat gepuffert Salzlinn huet vill Gebrauch, well et isotonesch a nettoooxesch ass fir déi meescht Zellen. Et kann benotzt ginn fir Stoffer ze verdënnen an et ass oft benotzt fir Container vu Zellen ze spülen. PBS kann als Verdauungsvermëttlung bei verschiddenen Methoden zum Trocken Biomolekülen benotzt ginn, well d'Waassermoleküle bannend dem Stoffprotein esou strukturéiert sinn. Et wäert "getrocknegt" a immobiliséiert ginn op eng zolitt Uewerfläch.
Den pH bleiwt stänneg an konsequent fir d'Zerstéierung vun Zellen ze verhënneren.
Den Dënnfilm vu Waasser deen an d'Substanz bindet, verhënnert d'Denaturatioun oder aner konforme Verännerungen. Carbonat-Puffer kënnen fir deen selwechten Zweck benotzt ginn, awer mat manner Effizienz.
PBS kann och benotzt ginn fir e Referenzspektrum ze huelen, wann d'Proteinadsorptioun an der Ellipsometrie gemooss gëtt.