Dëse Puffer gëtt fir Elektrophorese-Trennung vun der DNA benotzt
TBE-Puffer ass besonnesch nëtzlech fir d'Trennung vu kleng DNS-Fragmenter (MW <1000), wéi kleng Produkter vu Restriktiv- Enzymverdgasen.
TBE huet eng méi grouss Pufferkapazitéit a gëtt méi schaarfer Auflösung als TAE-Buffer . TAE-Buffer ass eng Léisung aus Tris Basis, Essigsäure an EDTA (Tris-Acetat-EDTA).
TBE ass allgemeng méi deier als TAE an hänkt vu DNA-Ligase hemmt, wat Problemer kann änneren wann d'DNA-Purifikatioun an d'Ligageschrëft beaflosen. Mat den dräi einfachen Schrëtt, déi no folgend sinn, léiert wéi een TBE-Buffer mécht. Et sollt net méi wéi 30 Minutten daueren fir dësen Zwëschelcher ze kreéieren. Hei ass wéi:
Bereet e Stock Stock Solution vun EDTA
Eng EDTA (Ethylendiamin-Tetraessigsäure) -Lösung sollt viru laanger Zäit virbereet ginn. D'EDTA wäert net komplett an enger Léisung goen, bis de pH un 8.0 ugepasst gëtt. Fir enger 500-Milliliter-Lager Léisung vun 0,5 M EDTA, wäerte 93,05 Gramm EDTA-Dinatriumsal (FW = 372,2) weien. Dann op 400 Milliliter deyoniséiertem Waasser ofléisen an de pH mat NaOH unzepassen. Duerno uplooss d'Léisung op e finalen Volume vu 500 Milliliter.
Bereet eng Stock Solutioun vun TBE
Maacht eng konzentresch (5x) Stock Léisung vu TBE duerch Waasserstoff 54 g Tris Base (FW = 121,14) a 27,5 g Borsäure (FW = 61.83) an an an ongeféier 900 Milliliter Deyoniséierter Waasser. Zousätzlech 20 Milliliter vun 0,5 M EDTA (pH 8,0) addieren an d'Léisung op eng definitivst Band vu 1 Liter ze stellen.
Dës Léisung kann bei Raumtemperatur gelagert ginn, awer e Präzisit an eeler Léisungen bilden. De Puffer an Glasflaschen gespäichert a verloosst wann e Präzisitéit geformt huet.
Bereet eng funktionnéiert Solutioun vun TBE
Fir d'Agarosegelelektrophoresis kann e TBE-Puffer bei enger Konzentratioun vu 0,5x (1:10 Verdënnung vum konzentréiert Lager) benotzt ginn. Loosst d'Stock Léisung ëm 10x an deioniséiertem Waasser. Schlussendlech Konzentratioune sinn 45 mM Tris-borat an 1 mM EDTA. De Puffer ass elo fäerdeg fir den Aarm vum Gels z'installéieren .
Wat Dir braucht
Fir TBE Buffer ze maachen, braucht Dir nëmme véier Substanzen. Déi weider Elementer op dëser Lëscht sinn Ausrüstung. Déi véier Substanzen déi néideg sinn EDTA-Dinatriumsalz, Tris-Base, Borsäure an deyoniséiertem Waasser.
Wat fir eng Ausrüstung brauch Dir e pH Meter an Kalibrierstandards unzegoen. Zousätzlech zu deem Dir braucht 600 Milliliter a 1500 Milliliter Becher oder Flaschen. D'Ausrüstung vun Ärem Ausrüstungsbedürfnisser gi graduéiert Zylinder a Rousen a Rousplaten.
Kuckt d'Inventar am Labo un, fir datt Dir alles hutt wat Dir braucht, ier Dir ugefaangen hutt. Nodeem méi schlëmm wéi wann Dir matzen an der Preparatioun vun enger Léisung ofzeschléissen, well Dir aus properem Material erauskoum.
Wann Äre Labo an der Schoul oder Är Aarbechtsplaz ass, kontroléieren mat dem equipéierte Personal datt se all d'Saachen am Stock waren. Dat maacht Iech ze späicheren an Zäit an Energie.