D'Entwécklung vun der PCR huet 1983 décidéiert, DNA-Sequenzéieren ze maachen an d'Uergel vu Nukleotide bei eenzelnen Genen z'identifizéieren.
D'Methode benotzt en thermesche Vëlo oder d'Wiederhuelung fir d'Erhéijung an d'Kühlen vun der Reaktioun fir DNA Schmelz a Replikatioun. Wann PCR weider geet, gëtt d'"nei" DNA als Skelett fir Replikatioun benotzt an eng Kettenreaktioun kënnt exponentiv amplifizéieren d'DNA-Schabloun.
PCR-Techniken ginn an vill Gebidder vun der Biotechnologie an d' Protein-Ingenieur , Klonen, Forensik (DNA-Fingerprinting), Vatertestprüfung, Diagnose vun Ierf- an / oder Infektionskrankheeten an Analyse vun Ëmweltproblemer applizéiert.
Bei der Forensik, besonnesch a PCR, ass besonnesch nëtzlech, well si verstäerkt souguer déi klengst Brag vun der DNA Beweiser. PCR kann och benotzt ginn fir DNA ze analyséieren déi Tausende vu Joer al gëtt, an dës Techniken ginn benotzt fir alles aus engem 800.000 Joer alen Mammoth zu Mumien aus der Welt ze identifizéieren.
PCR Prozedur ass wéi folgend:
- Initialiséierung: Dëse Schrëtt ass nëmme fir DNA-Polymerasen déi néideg Hot-Start-PCR erfuerderen. D'Reaktioun gëtt op 94 bis 96 ° C erhëtzt an no 1-9 Minuten.
- Denaturatioun: Wann d'Prozedur keng Initialiséierung brauch, ass d'Denaturatioun den éischte Schrëtt. D'Reaktioun gëtt 20-30 Sekonnen op 94-98 ° C erhëtzt. D'DNA-Schablounen déi Waasserstoffbindungen ginn gestoppt an eenzegstrong DNA-Moleküle geschaf.
- Annealing: D'Reaktiounstemperatur ass manner wéi 50 bis 65 ° C an 20-40 Sekonnen. D'Primer anneal fir d'Single-Strang vir DNA-Template. D'Temperatur ass während dëser Etapp extrem wichteg. Wann et ze waarm ass, kann de Primer kee Kraut verbinden. Wann et ze killt ass, kann de Primer perfekt bindend sinn. Eng gutt Obligatioun gëtt gebonnen, wann d'Primersequenz mat der Schablounsequenz mat der Héicht kënnt.
- Verlängerung / Dehnung: D'Temperatur während dësem Schrëtt variéiert jee no der Art vun der Polymerase. D'DNA-Polymerase synthetiséiert en komplett DNA DNA Strang.
- Schlusslängerung: Dëse Schrëtt gëtt no 70-74 ° C 5-15 Minuten no der Final PCR-Zyklus gemaach.
- Schluss hält: Dëse Schrëtt ass fakultativ. D'Temperatur gëtt op 4-15 ° C gehal a probéiert d'Reaktioun z'ënnerstëtzen.
D'Prozedur ass an dräi Stagren ausgeglach:
- Exponential Verstäerkung: Während all Zyklus, Produit (dat spezifescht Stück DNA, deen replizéiert ass) gëtt verdoppelt.
- Ofschafung: Als DNA-Polymerase verléiert Aktivitéit a verbraucht Reagentien, fiert d'Reaktioun verlangsamt.
- Plateau: Kee Produkt méi accumuléiert.